GoAstV、GPV、NDV和TMUV四重Nano-PCR检测方法的建立

1. GoAstV、GPV、NDV和TMUV引物设计与合成。

2. 单一Nano-PCR扩增GoAstV、GPV、NDV和TMUV。

3. 多重RT-PCR检测方法的建立及鹅病毒流行病学调查。

1. 黑龙江是养鹅大省，疾病风险是鹅健康的重要因素。

在现在注重饮食健康的社会环境中，拥有优质蛋白的鹅肉以及鹅绒鹅肝等附属产品更加符合现在的中国市场。中国的鹅肉消费与生产均排在世界首位。根据世界粮农组织（FAO）数据，我国商品鹅近年平均年出栏量约6.7亿只，鹅绒产量约4万吨，占全球总量的80%以上。而根据省畜牧业协会鹅业分会调研统计，我省商品鹅平均年出栏约4000万只，可产高品质鹅绒约1200吨。分别占全国的6%和3%。到2025年预计，全省商品鹅年出栏5000万只以上，鹅产业营业收入在100亿元以上。但是，由于受鹅抗病力强的影响，我国对鹅病的研究普遍较少，饲养规模较少时，发病率较低，但随着养殖规模和密度的不断增加，鹅病的发生率大幅上升，传播以久的疾病还没有有效控制，又不断的出现新的疫病。因此，疾病风险越来越成为影响鹅健康的最重要因素，直接决定了鹅产业发展。

2. 鹅病毒性疾病尤其是鹅病毒混合感染是引起鹅死亡的主要病原。

近年来的流行病学调查结果显示，我国常见的GoAstV和GPV是我国鹅场中常见病毒，检测阳性率为5.16%-58.21%。其中，GoAstV是我国检出率最高的病毒，阳性检出率达58.21%，是近年来我国鹅养殖中最主要的鹅病毒病原。而黑龙江省的检测结果显示了同样的结果，GoAstV阳性检出率为15%，位于第二位的GPV为9%，NDV和TMUV分别具有第三和第四高的阳性率。另外，不同病原混合感染检测结果显示，鹅群病原混合感染极为普遍，在这些混合感染的样本中多数检测到2~3种病毒的核酸，占样品总数的67.44%。其中，GoAstV及GPV同时检出所占比例最大，为36.28%。以上的结果表明，鹅养殖中GoAstV、GPV、NDV和TMUV病毒可能是造成鹅死亡的最重要病毒，同时，鹅养殖中多种病毒混合感染可能是我国规模化鹅场病毒性疫病复杂化和防控难度加大的重要原因。

3. 鹅病毒诊断方法更新研发滞后，高效快速的检测方法亟需研发。

传统上，这些病毒感染的诊断必须通过电子显微镜鉴定、免疫荧光或病毒分离；然而，这些技术耗时、费时费力，相对不敏感。此外，在某些情况下，由于缺乏抗体或合适的细胞系，这些方法可能无法实现。单一PCR已成为直接鉴定或验证上述病毒的首选方法。已经开发了几种PCR方法。然而，使用传统的PCR技术单独检测几种病毒是耗时、费力和昂贵的。而且GoAstV作为一种新兴病毒，可靠的检测方法尚未完全建立，因此，有必要建立一种同时检测包含新兴病毒和其他3种鹅重要病毒的检测方法。近年来，纳米颗粒辅助PCR（Nano-PCR）技术得到了发展，其将纳米颗粒纳入PCR系统。纳米粒子，通常大小在1-100nm之间，包含20-15000个原子，通常具有良好的导热性，对PCR反应系统中DNA模板与引物的结合、DNA聚合酶的浓度以及反应物的聚合反应有调节作用，这大大增加了扩增效率，并降低了非特异性扩增。本研究利用新的多重Nano-PCR检测技术，结合本实验室相关的研究基础条件，开发同时检测GoAstV、GPV、NDV和TMUV的多重Nano-PCR检测方法将具有重大科学意义，能实现“一次检4毒”，是快速、高灵敏鹅病毒病诊断以及及时防控的最佳途径。

1.      解决在对鹅类疾病检测中因对混合感染检测速度慢，导致防控不及时等问题

1.      建立能够对GoAstV、GPV、NDV和TMUV混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断的四重Nano-PCR检测方法。

2.     检测敏感性在10³ copies/μL以上，采集并检测临床发病鹅样品数量50-100份。

3.     研究成果以论文形式发表，发表论文1篇。