1、FCV与FHV-Ⅰ病毒及其基因组
FCV无囊膜，属于杯状病毒科（Calicivirdae），水疱疹病毒属（Vesivirus）。感染猫后常引起的临床症状表现为发热、喷嚏、鼻炎及结膜炎等[1]。其基因组为单股正链RNA[2]，全长共7690个核苷酸，极易发生变异。其上有三个阅读框架（OFRs），利用MegAlign软件进行比对，发现OFR1的同源性在0FR1、OFR2、OFR3中最高，为85.68%[3]。故针对该序列设计新的检测引物和方法。而FHV-Ⅰ属于疱疹病毒科（Herpesviridae），α-疱疹病毒亚科(Alpha-Herpesvirus subfamily)，水痘疱疹病毒属（Varicella virus genus)。感染猫后常引起的临床症状表现为角膜溃疡、打喷嚏、失明、嗜睡及厌食等[4]。其基因组为线性双链DNA，全长共134～137kb，在其疫苗分离株中检测到UL28与UL44基因具有独特的单核苷酸多态性（SNP）[5]故针对该序列设计新的检测引物与方法。
2、FCV与FHV-Ⅰ病毒流行学
目前FCV与FHV-Ⅰ病毒已经在全世界广泛流传开来，欧洲六国（英国、瑞典、荷兰、德国、法国、意大利）的联合调查显示超100份随机采集样品中FCV的总体患病率为9.2%[6]。2010-2012 年，澳大利亚各地报告的被推定为猫疱疹病毒 （FHV） 或猫杯状病毒 （FCV）的猫上呼吸道疾病（URTD）病例共达251例[7]。2022年，在日本9个都道府县的66只家猫中，分别有11只（16.7%）和14只（21.2%）猫检出FHV-1和FCV[8]。而在我国许多省份也均有FCV与FHV-Ⅰ传播，北京地区进行过FCV与FHV-Ⅰ检测的412例病例中FCV与FHV-Ⅰ的阳性率分别为26.3%和46.3%[9]，广东省内来自五个不同地区的380份拭子中FCV与FHV-Ⅰ的阳性率分别为44.1%和6.9%[10]，2012年甚至从华南虎身上也分离出了一株FHV-1 病毒[11]。虽然目前FCV被认为是宿主特异性的，并且只感染猫科动物。但是，已经有几篇关于从腹泻的狗的粪便样品中分离出FCV样病毒的报道[12]。因此我们不但要警惕FCV与FHV-Ⅰ本身对猫科动物的危害，更要及早预防其可能对其他动物带来的潜在风险。
3、FCV与FHV-Ⅰ荧光定量RT-PCR检测技术的发展
2001年Sykes J E等[13]开发了一种单管、多重逆转录RT-PCR测定法，用于检测患有上呼吸道疾病 （URTD） 的猫体内的猫疱疹病毒 1 （FHV1）和猫杯状病毒，其结合了一种能够提取 DNA 和 RNA 的简单、快速的提取程序。该测定法被发现在体外与单纯性测定法一样敏感，而单纯性测定法先前已被证明对实验感染猫的每种病原体的培养物一样敏感或更敏感[14]。但是该方法所需时间较长，不太适合进行临时医疗诊断。于是Marsilio F等[15]在2005年研究出了一种新的巢式PCR（nPCR）检测方法，用于诊断猫杯状病毒感染，并将nPCR灵敏度与其他诊断技术进行比较，例如细胞培养病毒分离和逆转录酶-聚合酶链反应（RT-PCR），最终得出结论nPCR比病毒分离和RT-PCR更敏感，所需时间也相应缩短，不过并未在特异性方面作出评价。此后随着实时荧光定量RT-PCR技术的发展，因其高效、准确的特点，许多新的检测技术应运而生。Meli M L等[16]于2017年验证了两种已发表的针对FCV第一开放阅读框（ORF 1）保守区域的实时TaqMan RT-PCR检测方法[17]。其利用实时逆转录聚合酶链式反应测定法来检测猫的猫杯状病毒感染，并通过使用SYBR green I熔融曲线分析，可以凭借其熔解温度来区分分离株。经评测该检测方法不仅在很宽的模板浓度范围内皆呈现出较高的灵敏性与线性，可以准确测定病毒载量，还可以在收到样品后2小时内检测到FCV的存在，具有很高的时效性，进一步推动了检测技术的发展。但是临床的实际情况是FCV往往容易和FHV-1同时感染，因此构建出一种双重检测的方法迫在眉睫。2024年，Thieulent C J[18]开发和验证了用于检测猫呼吸道疾病复合物相关的病原体的多重一步法 qPCR/RT-qPCR 检测技术。其通过设计靶向 FHV-1 的糖蛋白 B （gB） 和 FCV 的开放阅读框 （ORF） 1 的特异性正向和反向引物和探针，并经过灵敏度、特异性、重复性和重现性测验论证了与传统的传染性病原体鉴定方法，如细菌培养、病毒分离和常规PCR相比多重qPCR/RT-qPCR是一种快速、灵敏的技术，明显更适用于作为兽医临床诊断的方法。
4、总结
目前，国内对猫杯状病毒（FCV）和猫疱疹病毒Ⅰ型（FHV-1）的研究主要集中在病毒特性、致病机理、流行病学以及疫苗研发等方面。在诊断方法上，尽管已有一些常规的检测手段，例如血清学检测、病毒分离和核酸检测等，但存在检测窗口期长、灵敏度较低等局限性。因此，开发一种快速、准确的猫杯状病毒、猫疱疹病毒Ⅰ型双重荧光RT-PCR检测试剂盒具有重要的临床价值和研究意义。
而近年来，国内外学者在荧光PCR技术方面取得了显著进展，为其应用于猫杯状病毒、猫疱疹病毒Ⅰ型检测提供了可能。通过优化引物和探针设计，提高荧光PCR反应的灵敏度和特异性，有助于实现快速、准确的检测。此外，双重荧光RT-PCR检测试剂盒可以同时检测两种病毒，提高了检测效率，为兽医提供了更为便捷的诊断工具。
总结来看，猫杯状病毒、猫疱疹病毒Ⅰ型双重荧光RT-PCR检测试剂盒的研究正处于快速发展阶段，国内外学者正在积极投入研发力量，以期为宠物猫健康事业提供更有效的检测手段。本项目的研究将为这一领域贡献新的技术和产品，推动宠物猫诊断和治疗水平的提升。
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