基于网络药理学及分子对接探究黄杞苷治疗银屑病的作用机制

银屑病已经被确定为由T细胞介导的慢性炎症复发性皮肤疾病，传统治疗银屑病药物副作用明显，治疗周期长，价格较高，对患者家庭经济负担过大。中药土茯苓中含有的成分的黄杞苷因具有抗炎抗氧化等药理作用被研究人员广泛关注，但其治疗银屑病方面却未见报道。本研究基于网络药理学及分子对接探究黄杞苷治疗银屑病的潜在靶点及作用机制，后续通过建立小鼠银屑病模型，观察与检测皮损改变、PASI评分、病理变化、炎症因子等方面变化，验证网络药理学预测结果，阐明黄杞苷对银屑病的治疗作用机制，为黄杞苷治疗银屑病的临床应用提供理论依据。

（1）基于网络药理学及分子对接探究黄杞苷治疗银屑病的潜在靶点和作用机制。（已完成）

（2）将小鼠进行分组，使用咪喹莫特作为诱导剂，通过涂抹的方式建立咪喹莫特诱导的银屑病小鼠模型。

（3）通过观察小鼠皮损面积和评定严重程度指数（PASI），测定脾指数和制作皮肤病理组织切片（HE染色），探究黄杞苷对咪喹莫特诱导的银屑病小鼠模型的治疗作用。

（4）通过使用ELISA方法检测黄杞苷对银屑病模型小鼠血清中促炎细胞因子TNF-α、IL-17等细胞因子表达水平的影响，研究黄杞苷通过降低TNF-α、IL-17等分泌水平从而发挥对银屑病小鼠的保护作用。

（5）通过Western Blot方法验证网络药理学分析结果，检测黄杞苷对关键靶点的影响和对PI3K/Akt信号通路的调控作用，阐明黄杞苷治疗银屑病的作用机制。

银屑病作为一种慢性的复发性疾病，世界人口中大概有2%-3%的患病率，欧美等国家发病率与非洲和亚洲人群相比较，患病率更高，我国银屑病患者也达到数百万。银屑病的病程呈慢性表现，欧美等国家的人容易复发，季节性明显，大多数患者在冬季会加重症状，夏季则相反会得到缓解。据调查发现，其发病年龄具有双峰表现，年龄在15岁-30岁及50岁-60岁容易病发。银屑病影响着病人生活、工作、心理，对广大患者治疗产生极大负担。根据调查的研究发现，患银屑病的人的死亡风险增加，与心血管疾病、糖尿病、精神疾病相关，而且银屑病人与常人相比较容易出现自杀抑郁的倾向。银屑病是由免疫系统介导的一种多基因遗传的炎症性的疾病，其特征性标志是产生持续不断的炎症，导致不受控制的角质形成细胞的增殖和异常的分化。临床分型可分为斑块状银屑病（寻常型银屑病）、脓疱型银屑病、红皮病型银屑病、关节病型银屑病。典型临床表现为边界清楚的红斑，上覆银白色鳞肩等。除皮肤表现，严重的患者还可能积累一系列疾病，如高血压病、糖尿病、高血脂、炎症性肠病等。且该病易复发、并难以根治，不仅对患者的身体健康有影响，还为患者带来了沉重的心理负担，严重影响了患者的生活质量。银屑病的发病机制错综复杂，包括免疫调控异常、炎症因子浸润、细胞信号的异常转导、角质形成细胞的过度増殖，使银屑病反复发作，难以根治。

目前治疗银屑病的方法是当患者皮损较小时，尽量采用外用药。其传统治疗主要为外用维生素D3衍生物类，如卡泊三醇、他卡西醇等；激素类药膏也是目前治疗银屑病的常用药物之一，常用的有丙酸氟替卡松、倍他米松等；维A酸类包括他扎罗汀等；焦油类等外用药。口服药物有甲氨蝶呤、维A酸类等，糖皮质激素不常规用于银屑病的系统治疗。现阶段常用的生物制剂有TNF-α拮抗剂，如英夫利昔单抗、 阿达木单抗；IL-17A拮抗剂，如司库奇尤单抗、依奇珠单抗；IL-23和 IL-12拮抗剂，如乌司奴单抗。马婧一研究发现，银屑病是LCN2通过激活KCs的胆固醇合成通路,并通过激活此通路的关键基因SREBP2而诱导KCs炎症诱发病症。Kamiya K等研究发现，参与银屑病发病机制的细胞，通过分泌TNF-α、IFN-γ、IL-17等细胞因子以及角质形成细胞不可控制的增殖分化，促使表皮过度生长，中性粒细胞浸润以及增加Th1/Th17细胞数量，从而使炎症持续的时间变长，导致银屑病反反复复发作。乔佩研究发现，在银屑病患者皮损中QA的表达水平显著低于非皮损及健康对照，QA表达水平与银屑病患者严重程度指数之间存在显著负相关，发现了银屑病患者皮肤表面有微生物菌群的Trp代谢异常，其终末端产物QA异常低表达,且与PASI评分呈显著负相关。王亚男研究发现，寻常型银屑病的发生发展被加重是由于METTL3下调介导的m6A甲基化下调。通过MeRIP-seq及分析推测，m6A甲基化下调可能通过调节Wnt信号通路加重寻常型银屑病的发展。

虽然生物制剂治疗效果比较好，明显改善了患者的生活质量，但是价格比较高，治疗周期长，对患者家庭负担很大，相对比于传统的治疗药物，天然药物有价格低廉，毒副作用小等优点。黄杞苷是从中药中提取出来的产物，具有良好的抗炎作用，但是在治疗银屑病的方面未见相关报道。

黄杞苷是一种从中药土茯苓中提取分离的二氢黄酮苷类化合物。有研究表明，黄杞苷能够促进内皮细胞的迁移能力、内皮细胞管腔形成和血管新生的作用。黄杞苷药用价值高，药理作用广泛，具有杀菌抗炎、抗氧化等药理作用。Haichong Wu等研究发现，黄杞苷在脂多糖诱导的小鼠子宫内膜炎模型中发挥治疗作用，降低TNF-α、IL-1β、IL-6细胞因子的表达水平，并调节TLR4介导的NF-κB信号通路。Xian Jiang等研究发现，黄杞苷显著抑制脂多糖诱导的急性肺损伤小鼠模型中TNF-α等促炎因子水平，调控NF-κB信号通路发挥抗炎作用，从而治疗急性肺损伤。Baixing Li等研究发现黄杞苷抑制MAPK和NF-κB信号通路的激活，下调炎症因子的表达水平，在椎间盘退变大鼠模型体内注射黄杞苷，可以有效缓解症状。刘慧研究发现，黄杞苷对大鼠脑缺血再灌注损伤具有较好的保护作用,通过激活VEGF/Vasohibin和Ang-1/Tie-2信号通路，促进了血管新生,提高血管的稳定性。

网络药理学是基于系统生物学的理论，对生物系统的网络分析，选取特定信号节点进行多靶点药物分子设计的新学科。网络药理学对信号通路的多途径调节进行强调，会提高药物的治疗效果，降低毒副作用，从而使新药临床试验的成功率提高，节省药物的研发费用。网络药理学从系统生物学和生物网络平衡的角度阐释疾病的发生发展过程、从改善或恢复生物网络平衡的整体观角度认识药物与机体的相互作用并指导新药发现。

（1）选用天然来源的药物黄杞苷，相较于传统治疗银屑病的药物有毒副作用低、价格低廉、易获取的优势。

（2）通过网络药理学及分子对接探究黄杞苷治疗银屑病的潜在靶点和作用机制并进行体内实验验证，阐明黄杞苷对银屑病的治疗作用机制。

（1）技术路线

（2）拟解决的问题

①阐明黄杞苷治疗银屑病的作用机制。
②明确黄杞苷对银屑病小鼠模型的治疗作用。

（3）预期成果

①通过网络药理学和分子对接方法挖掘黄杞苷治疗银屑病的靶点，进一步建立银屑病小鼠模型研究与验证黄杞苷治疗银屑病的作用机制；

②发表SCI一篇或中文文章一篇。

2023.05-2023.07 利用网络药理学和分子对接挖掘黄杞苷对银屑病潜在靶点与作用机制；

2023.08-2023.09 使用咪喹莫特诱导，建立银屑病小鼠模型；

2023.10-2023.12 根据银屑病皮损面积及疾病严重程度评分标准，对小鼠背部皮损情况进行评分，测定脾脏指数，制作小鼠背部皮肤石蜡包埋切片并进行HE染色；

2024.01-2024.03 使用ELISA方法检测细胞因子分泌水平，Western Blot法检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白水平变化；

2024.04-2024.05 总结整理并分析数据，撰写结题报告。